উপসর্গ সর্বদা মূল শব্দ বা ধাতুর আগে বসে নতুন শব্দ গঠন করে, আর প্রত্যয় বসে মূল শব্দ বা ধাতুর শেষে। এটিই এদের মধ্যে প্রধান অবস্থানগত পার্থক্য।

১. উপসর্গ ও প্রত্যয় উভয়েই নতুন শব্দ গঠন করে, তাই ‘নতুন শব্দ গঠন’ এদের মৌলিক পার্থক্য নয় বরং সাধারণ গুণ।
২. উপসর্গ স্বাধীন অব্যয় হিসেবে কাজ করলেও প্রত্যয় কেবল বর্ণ বা বর্ণসমষ্টি যা শব্দের শেষে যুক্ত হয়।
৩. উপসর্গ শব্দের অর্থের সংকোচন, প্রসারণ বা পরিবর্তন ঘটায়, যা প্রত্যয়ের ক্ষেত্রে সবসময় একই ধারায় ঘটে না।

অতিরিক্ত তথ্য: খাঁটি বাংলা উপসর্গ ২১টি এবং তৎসম উপসর্গ ২০টি।